PRACTICA 1: PCR-LATEX (AGLUTINACION EN PORTA)
PRACTICA NUMERO 1
23/10/17
OBJETIVOS:
Poder observar la aglutinación en porta de la Proteina C reactiva en suero humano.
Poder observar la aglutinación en porta de la Proteina C reactiva en suero humano.
UTILIDAD CLÍNICA:
La PCR-Latex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de latex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
La PCR-Latex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de latex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
FUNDAMENTOS:
La PCR reactiva es una proteína en fase aguda presente en el suero de pacientes, la cual puede incrementarse en procesos infecciosos bacterianos y virales, inflamación y neoplasias. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 md/dl.
La PCR reactiva es una proteína en fase aguda presente en el suero de pacientes, la cual puede incrementarse en procesos infecciosos bacterianos y virales, inflamación y neoplasias. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 md/dl.
APARATAJE:
No se utilizan aparatos.
No se utilizan aparatos.
MATERIALES:
-Porta.
-Puntas de pipeta.
-Suero fresco.
-Porta.
-Puntas de pipeta.
-Suero fresco.
REACTIVOS:
-Latex: suspension de particulas de latex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana.
-Control -: suero huemano con una concentracion de PCR >20 mg/L.
-Control +: suero animal.
-Latex: suspension de particulas de latex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana.
-Control -: suero huemano con una concentracion de PCR >20 mg/L.
-Control +: suero animal.
PROCEDIMIENTO:
-Método cualitativo:
1.Atemperar los reactivos y muestras. La sensibilizacion del ensayo disminuye a tº bajas.
2.Depositar 50 microlitros de la muestra y una gota de cada uno de los controles sobre los círculos del porta.
3.Mezclar el reactivo de PCR-Latex antes de usar y depositar una gota de 50 microlitros junto a las gotas anteriores.
4.Mezclar las gotas.
5.Agitar durante 2 minutos.
-Metodo semicuantitativo:
1.Realizar diluciones dobles de la muestra en solucion salina 9 mg/L.
2.Proceder para cada dilucion como en la prueba cualitativa.
-Método cualitativo:
1.Atemperar los reactivos y muestras. La sensibilizacion del ensayo disminuye a tº bajas.
2.Depositar 50 microlitros de la muestra y una gota de cada uno de los controles sobre los círculos del porta.
3.Mezclar el reactivo de PCR-Latex antes de usar y depositar una gota de 50 microlitros junto a las gotas anteriores.
4.Mezclar las gotas.
5.Agitar durante 2 minutos.
-Metodo semicuantitativo:
1.Realizar diluciones dobles de la muestra en solucion salina 9 mg/L.
2.Proceder para cada dilucion como en la prueba cualitativa.
RESULTADOS:
Se examina la presencia o ausencia de aglutinacion inmediatamente después de agitar para que no se produzca falsos positivos.
La presencia de aglutinacion indica una concentración de PCR igual o superior a 9md/dl.
Resultado del procedimiento cualitativo:
Resultado del procedimiento semicuantitativo:
En el método semicuantitativo se define titulo como la mayor dilucion que da resultado positivo.
En este caso seria 1
Cálculos: 6 x titulo de PCR: 6x1 : 6 mg/l.
Se examina la presencia o ausencia de aglutinacion inmediatamente después de agitar para que no se produzca falsos positivos.
La presencia de aglutinacion indica una concentración de PCR igual o superior a 9md/dl.
Resultado del procedimiento cualitativo:
Resultado del procedimiento semicuantitativo:
En el método semicuantitativo se define titulo como la mayor dilucion que da resultado positivo.
En este caso seria 1
Cálculos: 6 x titulo de PCR: 6x1 : 6 mg/l.
OBSERVACIONES:
-Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
-No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipermicas.
-No congelar , la congelación de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de estos.
-La intensidad de la algutinacion no es indicativa de la concentración de PCR en las muestras ensayadas.
-El diagnostico clinico no debe realizarse unicamente con los resultados de un unico ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clinicos del paciente.
-Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
-No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipermicas.
-No congelar , la congelación de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de estos.
-La intensidad de la algutinacion no es indicativa de la concentración de PCR en las muestras ensayadas.
-El diagnostico clinico no debe realizarse unicamente con los resultados de un unico ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clinicos del paciente.
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