PRACTICA 5: ESTREPTOLISINA O LIOFILIZADA.

PRACTICA NUMERO 5

20/11/17

OBJETIVOS:

El objetivo es averiguar el titulo de Anti-SLO.

UTILIDAD CLINICA:

La Estreptolisina o ( SLO ) liolizada es un purificado procedente del cultivo de Estreptococos B-Hemoliticos. Se trata de un producto estandarizado para la determinacion cuantitativa del titulo de antiestreptolisina 0, por la tecnica de inhibicion de la hemolisis.

FUNDAMENTOS:

El carácter inmunogenico de la SLO permite valorar la extensión de una infección estreptococia, por simple titulación del nivel en suero de anticuerpos anti-SLO.

Diluciones crecientes del suero problema se enfrentan con una cantidad constante de SLO, en presencia de una suspensión de hematíes, determinándose la dilucion de suero mas alta capaz de inhibir el poder hemolítico de la toxina. La inversión de dicha dilucion corresponde al titulo del suero.

APARATAJE:

No se utiliza ningún aparato.

MATERIALES:

-Pipeta y puntas de pipeta.

-Placa con pocillos.

REACTIVOS:

-Estreptolisina o liofilizada.

-Tampon fosfato ph 6,5.

-Suero.

-Hematíes.

PROCEDIMIENTOS:

-Preparar una suspension de hematies lavado ( 5 ml de suspension de hematies + 95 ml de tampon fosfato ).

-Diluir el suero del paciente

  1.Para la fila 1: 0.2 ml de suero + 1.8 ml de tampon ( 1/10 )

  2.Para la fila 2: 0.1 ml de suero + 2.4 ml de tampon ( 1/25 )

-Dispensar 50 microlitros de tampon en los 10 pocillos de la fila 1 y fila 2.

-Añadir 50 microlitros de la dilucion 1/10 al primer pocillo de la fila 1, y realizar diluciones hasta el pocillo 9 y hay desechar. ( al pocillo 10 no se hecha la dilucion por que es el control ).

-Añadir 50 microlitros de la dilucion 1/25 al primer pocillo de la fila 2 y realizar diluciones hasta el pocillo 9 y hay desechar ( al pocillo 10 no se hecha la dilucion por que es el control ).

-Añadir 25 microlitros de Disolución SLO a todos los pocillos de la fila 1 y 2 excepto al pocillo 10 de la fila 2.

-A continuación se agita suavemente y se incuba 15 minutos a 37ºC.

-Por ultimo, añadir 25 microlitros de suspensión de hematíes al 3 % a todos los pocillos de la fila 1 y 2.

-Agitar suavemente e incubar 45 minutos a 37ºC, agitando después de los primero 15 minutos.

-Por ultimo dejar sedimentar durante 50 minutos a temperatura ambiente.

RESULTADOS:

El titulo de antiestreptolisina O corresponde a la inversa de la mayor dilucion de su cuyo tubo no se detecta hemolisis en el sobrenadante.

OBSERVACIONES:

-Hematíes: El sobrenadante debe aparecer claro ( libre de hemolisis )

-Estreptolisina O: El sobrenadante debe presentar hemolisis evidente.