PRACTICA 6: INMUNOGLOBULINA M y G ( TURBIDIMETRIA )

PRACTICA NUMERO 6

4/12/17

OBJETIVOS:

Determinación cuantitativa de inmunoglobulina M.

UTILIDAD CLÍNICA:

Los anticuerpos anti-IgM forman compuestos insolubles cuando se combinan con la IgM de la muestra del paciente, ocasionando un cambio de absorbancia proporcional a la concentración de IgM en la muestra y que puede ser cuantificada por comparación con un calibrador de IgM de concentración conocida.

FUNDAMENTOS:

La IgM es la única inmunoglobulina que sintetiza el recién nacido. En adultos representa el 5-10 % del total de inmunoglobulinas. Su estructura es pentamerica y su elevado peso molecular evita su paso a espacios extravasculares.

Su concentración se halla disminuida en enfermedades relacionadas con deficiencias hereditarias o adquiridas de la producción de inmunoglobulinas.

APARATAJE:

Espectofotometro:

MATERIALES:

-Baño maría.

-Cubetas de espectofotometria.

-Pipeta y puntas de pipeta.

REACTIVOS:

-Diluyente (R1): Tampon tris 20 mmol/L.

-Anticuerpo (R2): Suero de cabra.

PROCEDIMIENTO:

-Preparar el calibrador:

Tubo 1: 100 microlitros de CINa 9. (Factor 0 ).

         2: 10 microlitros de calibrado + 90 microlitros de CINa 9.  (Factor 0.1 )

         3: 25 microlitros de calibrado + 75 microlitros de CINa 9.  (Factor 0.25)

         4: 50 microlitros de calibrado + 50 microlitros de CINa 9.  (Factor 0.5 )

         5: 75 microlitros de calibrado + 25 microlitros de CINa 9.   (Factor 0.75)

         6: 100 microlitros de calibrado  (Factor 1.0 )

-Medirlo en el espectofotometro.

-Preparar en una cubeta 800 microlitros de R1 + 10 microlitros de muestra.

-Mezclarlo y medirlo en el espectofotometro.

-Inmeditamente despues de leerlo añadirle a la cubeta 200 microlitros de R2, mezclarlo y leerlo en el espectofotometro.

       

RESULTADOS:

-Absorbancia de la dilucion del calibrado:

1. 0,107.

2. 0,195.

3. 0,271.

4. 0,431.

5. 0,528.

6. 0,648.

-Concentracion de la dilucion del calibrado:

1. 0

2. 25,5

3. 63

4.126

5. 189.

6. 252.

-ABS 1:

1. 0,036.

2. 0,027.

3. 0,024

4. 0,055.

5. 0,047.

6. 0,18.

-AB2:

1.0,075.

2. 0,173

3. 0,370.

4. 0,420

5. 0,589.

6. 0,645.

OBSERVACIONES: