PRACTICA 7: ANTIGENOS BACTERIANOS

PRACTICA NUMERO 7

11/12/17

OBJETIVOS:

Esta práctica consiste en realizar una técnica de aglutinación en tubo para la detección y semicuantificación de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos (suspensiones bacterianas coloreadas y estandarizadas), aglutinan en presencia del anticuerpo homólogo correspondiente en las muestras ensayadas.

FUNDAMENTOS:

El diagnóstico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del título de anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente. La determinación de estos anticuerpos forma las bases para el ensayo de Widal que establece que altos niveles de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos microorganismos.

El resultado de la prueba se obtiene tras ensayar las diluciones dobles del suero problema en solución salina, frente a un volumen igual de solución antigénica estandarizada.

MATERIALES:

• Pipetas y puntas
• Tubos y gradilla

REACTIVOS:

• Reactivos con antígenos bacterianos (S. typhi “O”, S.typhi “H”).
• Control + y –
• Suero salino fisiológico

PROCEDIMIENTO:

Nosotros vamos a realizar el método de aglutinación en tubo (semicuantificación):

-Prepararemos una serie de tubos, tal como se muestra en la imagen.Preparamos 6 tubos para S. typhi “O” y otros 6 tubos para S.typhi “H”.

Como muestra usaremos el frasco de antígenos febriles.

Lo que haremos es una serie de diluciones de la muestra, para semicuantificarla.

-El siguiente paso es preparar 2 tubos más para el control positivo y el negativo: 0,1 mL control + 0,9 mL de solución salina.

-A continuación añadiremos una gota (50 microlitros) de antígeno a cada tubo de los 6 tubos (diferenciando los tubos de S.typhi “O” y S.typhi “H”).

-Agitamos para homogeneizar e incubamos a 37ºC durante 24 horas.

RESULTADOS: 

El título es el último tubo que presenta aglutinación. El control positivo debe presentar aglutinación y el control negativo no, por lo que se verá todo el líquido coloreado.

 Los dos últimos tubos corresponden a los controles. El negativo no presenta aglutinación  mientras que el positivo si presenta aglutinación.

Con respecto a las muestras, que corresponden a S.typhi “O” (antígeno somático), el título correspondería al segundo tubo, ya que es el último que presenta aglutinación. Por lo tanto, el título es 1/40.