PRACTICA 8: INMUNOELECTROFORESIS

PRACTICA 8: INMUNOELECTROFORESIS

5/02/2018

OBJETIVOS:

Separar las proteinas contenidas en un suero e identificar la posible presencia de IgG y Albumina.

UTILIDAD CLINICA:

La inmunoelectroforesis se utiliza para separar y caracterizar una mezcla de proteinas y examinar la especificad de la interaccion antigeno-anticuerpo.

FUNDAMENTOS:

Es una técnica de separación e identificación de sustancias que atraviesa dos fases, en la primera separamos proteínas de la muestra mediante una electroforesis convencional en agarosa; y en la segunda se practica un carril al recorrido electroforético y se lleva con un Ac antiproteína adecuado. La difusión del Ag y Ac permitirá que ambos se unan y reaccionen entre sí formando un complejo Ag-Ac que se hará visible en forma de unos arcos de precipitación.

APARATAJE:

MATERIALES:

• Alimentador de electroforesis
• Cubeta de electroforesis
• Aguja
• Pajita
• Papel de filtro
• Matraz Erlenmeyer
• Microondas
• Portas
• Placas petri
• Cámara Húmeda
• Pipetas automáticas

REACTIVOS:

• Ag (proteínas) IgG, suero, y albúmina.
• Tampón
• Agarosa
• Agua destilada
• Ac frente al suero
• Ac frente a IgG

PROCEDIMIENTO:

1. Diluir el tampón (x25), poniendo 40 mL del tampón y 960 mL de agua destilada.
2. El gel, ponemos 1,25 g de agarosa + 100mL de tampón diluido. Lo calentamos en el microondas a máx. potencia durante 1 minuto, lo sacamos y removemos, le damos golpes de 25 sec a máx. potencia, hasta que quede transparente, y sin grumos.
   
   
   
   
3. En el molde, lo depositamos cuando esté a 60º, para no derretir la cubeta de electroforesis que es de plástico. 
4. Ponemos el molde para carriles, que son una placa petri con 4 portas unidos de la siguiente manera:
5. Hacemos los pocillos con una pajita y quitamos con una aguja lo sobrante.

1. Dispensamos los Ag (proteínas) IgG, suero, y albúmina.
   
   
2. Electroforesis
1. Llenamos las cubetas de tampón sin cubrir la agarosa y le colocamos papel de filtro que haga de puente, lo recortamos para que este entero húmedo y sumergido en el tampón.
2. Ponemos el alimentador a 115 voltios, durante 35-45 minutos (que al final ha sido más tiempo) de negativo a positivo.
3. Dispensamos Ac, 50 microlitros, dejar difundir durante 24h en cámara húmeda. (IgG, y suero)

RESULTADOS:

1.